juntsukimoto/published_papers/47373464 水野 輝 竹内 美絵 堀井 雄登 月本 準 木野 倫子 石丸 直澄 篠原 康雄 伊藤 孝司 TGカイコ繭由来ヒトCTSA及びN型糖鎖改変体CTSAを用いたガラクトシアリドーシスマウスに対する酵素補充 (公社)日本生化学会 日本生化学会大会プログラム・講演要旨集 96 [1P 037] 20231000 juntsukimoto/published_papers/46289091 福池 凜 月本 準 堀井 雄登 竹内 美絵 加守 虹穂 三好 瑞希 篠原 康雄 伊藤 孝司 AAVPHP.eBを用いた脳室内単回投与によるNEU1欠損症に対する遺伝子治療 (公社)日本生化学会 日本生化学会大会プログラム・講演要旨集 96 [1P 532] 20231000 juntsukimoto/published_papers/48119064 三好 瑞希 月本 準 堀井 雄登 竹内 美絵 加守 虹穂 福池 凛 木野 倫子 石丸 直澄 伊藤 孝司 先天代謝異常症ガラクトシアリドーシスに対するより効果的な遺伝子治療薬開発 (公社)日本生化学会 日本生化学会大会プログラム・講演要旨集 95 2T16a 06 20221100 juntsukimoto/published_papers/40834618 Hiroki Tanaka Daisuke Tsuji Ryosuke Watanabe Yukiya Ohnishi Shindai Kitaguchi Ryuto Nakae Hiromi Teramoto Jun Tsukimoto Yuto Horii Kohji Itoh Aberrant autophagy in lysosomal storage disorders marked by a lysosomal SNARE protein shortage due to suppression of endocytosis. Lysosomal storage disorders (LSDs) are inherited metabolic diseases caused by genetic defects in lysosomal enzymes or related factors. LSDs are associated with excessive accumulation of natural substrates in lysosomes leading to central nervous system and peripheral tissue damage. Abnormal autophagy is also involved in pathogenesis, although the underlying mechanisms remain unclear. We demonstrated that impairment of lysosome-autophagosome fusion is due to suppressed endocytosis in LSDs. The fusion was reduced in several LSD cells and the brains of LSD model mice, suggesting that the completion of autophagy is suppressed by the accumulation of substrates. In this brain, the expression of the soluble N-ethylmaleimide sensitive factor attachment protein receptor (SNARE) proteins, VAMP8 and Syntaxin7, was decreased on the lysosomal surface but not intracellular. This aberrant autophagy preceded the development of pathological phenotypes in LSD-model mice. Furthermore, the enzyme deficiency leading to the substrate accumulation could suppress endocytosis, and the inhibited endocytosis decreased SNARE proteins localized on lysosomes. These findings suggest that the shortage of SNARE proteins on lysosomes is one of the reasons for the impairment of lysosome-autophagosome fusion in LSD cells. Defects in lysosomal enzyme activity suppress endocytosis and decrease the supply of intracellular SNARE proteins recruited to lysosomes. This shortage of lysosomal SNARE proteins impairs lysosome-autophagosome fusion in lysosomal storage disorders. Journal of inherited metabolic disease 45 6 1191 1202 20221100 10.1002/jimd.12558 36102069 juntsukimoto/published_papers/37022690 Yuto Horii Toshiki Iniwa Masayoshi Onitsuka Jun Tsukimoto Yuki Tanaka Hironobu Ike Yuri Fukushi Haruna Ando Yoshie Takeuchi So-Ichiro Nishioka Daisuke Tsuji Mariko Ikuo Naoshi Yamazaki Yoshiharu Takiguchi Naozumi Ishimaru Kohji Itoh Reversal of neuroinflammation in novel GS model mice by single i.c.v. administration of CHO-derived rhCTSA precursor protein Galactosialidosis (GS) is a lysosomal cathepsin A (CTSA) deficiency. It associates with a simultaneous decrease of neuraminidase 1 (NEU1) activity and sialylglycan storage. Central nervous system (CNS) symptoms reduce the quality of life of juvenile/adult-type GS patients, but there is no effective therapy. Here, we established a novel GS model mouse carrying homozygotic Ctsa IVS6+1g→a mutation causing partial exon 6 skipping with concomitant deficiency of Ctsa/Neu1. The GS mice developed juvenile/adult GS-like symptoms, such as gargoyle-like face, edema, proctoprosia due to sialylglycan accumulation, and neurovisceral inflammation, including activated microglia/macrophage appearance and increase of inflammatory chemokines. We produced human CTSA precursor proteins (proCTSA), a homodimer carrying terminal mannose 6-phosphate (M6P)-type N-glycans. The CHO-derived proCTSA was taken up by GS patient-derived fibroblasts via M6P receptors and delivered to lysosomes. Catalytically active mature CTSA showed a shorter half-life due to intralysosomal proteolytic degradation. Following single i.c.v. administration, proCTSA was widely distributed, restored the Neu1 activity, and reduced the sialylglycans accumulated in brain regions. Moreover, proCTSA suppressed neuroinflammation associated with reduction of activated microglia/macrophage and up-regulated Mip1α. The results show therapeutic effects of intracerebrospinal enzyme replacement utilizing CHO-derived proCTSA and suggest suppression of CNS symptoms. Methods & Clinical Development 9 25 297 310 20220600 10.1016/j.omtm.2022.04.001 35573044 juntsukimoto/published_papers/36055429 Jun Tsukimoto Yoshie Takeuchi Yuto Horii Toshiki Iniwa Yuri Fukushi So-ichiro Nishioka Kohji Itoh In Cellulo Crystallization of Human Neuraminidase 1 and Biological Roles of N-Glycans American Chemical Society (ACS) ACS Applied Bio Materials 2576-6422 5 1 205 213 20211209 10.1021/acsabm.1c01043 juntsukimoto/published_papers/38295487 Kohji Itoh Jun Tsukimoto Daisuke Tsuji Yuuto Horii Toshiki Iniwa Yuri Fukushi Haruna Ando Innovative gene therapy for lysosomal neuraminidase 1 (NEU1) deficiencies MOLECULAR GENETICS AND METABOLISM 1096-7206 129 2 S78 S79 20200200 10.1016/j.ymgme.2019.11.191 juntsukimoto/published_papers/36055483 Hideki Nakajima Miki Ueno Kaori Adachi Eiji Nanba Aya Narita Jun Tsukimoto Kohji Itoh Atushi Kawakami A new heterozygous compound mutation in the CTSA gene in galactosialidosis Springer Science and Business Media LLC Human Genome Variation 2054-345X 6 1 null null 20191200 10.1038/s41439-019-0054-x juntsukimoto/published_papers/36055461 Kotaro Koiwai Jun Tsukimoto Tetsuya Higashi Fumitaka Mafuné Ken Miyajima Takanori Nakane Naohiro Matsugaki Ryuichi Kato Serena Sirigu Arjen Jakobi Matthias Wilmanns Michihiro Sugahara Tomoyuki Tanaka Kensuke Tono Yasumasa Joti Makina Yabashi Osamu Nureki Eiichi Mizohata Toru Nakatsu Eriko Nango So Iwata Leonard M. G. Chavas Toshiya Senda Kohji Itoh Fumiaki Yumoto Improvement of Production and Isolation of Human Neuraminidase-1 in Cellulo Crystals In cellulo crystallization is a developing technique to provide crystals for protein structure determination, particularly for proteins that are difficult to prepare by in vitro crystallization. This method has a key advantage: it requires neither a protein purification step nor a crystallization step. However, there is still no systematic strategy for improving the technique of in cellulo crystallization because the process occurs spontaneously. Here we report a protocol to produce and extract in cellulo crystals of human lysosomal neuraminidase-1 (NEU1) in human cultured cells. Overexpression of NEU1 protein by the retransfection of cells pretransfected with neu1-overexpressing plasmid improved the efficiency of NEU1 crystallization. Microscopic analysis revealed that NEU1 proteins were not crystallized in the lysosome but in the endoplasmic reticulum (ER). Screening of the buffer conditions used to extract crystals from cells further improved the crystal yield. The optimal pH was 7.0, which corresponds to the pH in the ER. Use of a high-yield flask with a large surface area also yielded more crystals. These optimizations enabled us to execute a serial femtosecond crystallography experiment with a sufficient number of crystals to generate a complete data set. Optimization of the in cellulo crystallization method was thus shown to be possible. American Chemical Society (ACS) ACS Applied Bio Materials 2576-6422 2 11 4941 4952 20191118 10.1021/acsabm.9b00686 35021494 juntsukimoto/published_papers/36055467 Chiaki Komiya Akira Shigenaga Jun Tsukimoto Masahiro Ueda Takuya Morisaki Tsubasa Inokuma Kohji Itoh Akira Otaka Traceless synthesis of protein thioesters using enzyme-mediated hydrazinolysis and subsequent self-editing of the cysteinyl prolyl sequence <p>Thioester-producing protocol featuring carboxypeptidase Y (CPaseY)-mediated hydrazinolysis and subsequent self-editing of tag affords protein thioesters in a traceless manner.</p> Royal Society of Chemistry (RSC) Chemical Communications 1364-548X 55 49 7029 7032 20190000 10.1039/c9cc03583d juntsukimoto/published_papers/36055484 M. Motiur Rahman Takatsugu Hirokawa Daisuke Tsuji Jun Tsukimoto Seiji Hitaoka Tatsusada Yoshida Hiroshi Chuman Kohji Itoh Novel pH-dependent regulation of human cytosolic sialidase 2 (NEU2) activities by siastatin B and structural prediction of NEU2/siastatin B complex Elsevier BV Biochemistry and Biophysics Reports 2405-5808 4 234 242 20151200 10.1016/j.bbrep.2015.09.017 juntsukimoto/misc/43076012 伊藤孝司 西岡宗一郎 篠田知果 竹内美絵 月本準 佐々井優弥 大石高生 灘中里実 北川裕之 原園景 石井明子 小林功 笠嶋めぐみ 立松謙一郎 瀬筒秀樹 Development of neo-glycobiologics utilizing transgenic silkworm and natural glycan resources and functional evaluation 組換えカイコと天然糖鎖資源を活用するネオグライコバイオロジクスの創製と機能評価 (公社)日本薬学会 日本薬学会年会要旨集(Web) 0918-9823 142nd S12 3 20220000 juntsukimoto/misc/38295491 篠田 知果 西岡 宗一郎 月本 準 小林 功 笠嶋 めぐみ 松崎 裕二 飯野 健太 木下 崇司 三谷 藍 竹内 美絵 佐々井 優弥 辻 大輔 瀬筒 秀樹 伊藤 孝司 遺伝子組み換えカイコを用いたムコ多糖症I型酵素補充療法の確立 (公社)日本生化学会 日本生化学会大会プログラム・講演要旨集 93 [2Z01 031)] 20200900 juntsukimoto/misc/38295488 伊藤 孝司 西岡 宗一郎 月本 準 桐山 慧 北口 眞大 辻 大輔 カイコ創薬の新展開 蚕業革命の推進 組換えカイコを利用する人工糖タンパク質製剤の開発と応用 (公社)日本薬学会 日本薬学会年会要旨集 0918-9823 139 1 190 190 20190300 juntsukimoto/misc/38295490 伊藤 孝司 西岡 宗一郎 日高 朋 月本 準 桐山 慧 篠田 知果 竹内 美絵 麻植 真結子 辻 大輔 遺伝子組換えカイコによるヒトバイオ医薬品開発の現状と課題 ─リソソーム病治療薬開発の取り組みを中心に─ 社団法人 日本蚕糸学会 蚕糸・昆虫バイオテック 1881-0551 88 3 3_167 3_174 20190000 10.11416/konchubiotec.88.3_167 juntsukimoto/misc/38295494 月本 準 伊藤 孝司 ヒトノイラミニダーゼ4の発現と分子特性解析 (公社)日本薬学会 日本薬学会年会要旨集 0918-9823 137 3 72 72 20170300 juntsukimoto/misc/48752108 日高朋 西岡宗一郎 原園景 月本準 田中優希 堀井雄登 小林功 笠嶋めぐみ 辻大輔 辻大輔 石井明子 瀬筒秀樹 伊藤孝司 伊藤孝司 トランスジェニックカイコ繭由来カテプシンAの有効性評価とエンドグリコシダーゼによる糖鎖改変 日本糖質学会年会要旨集 36th null null 20170000 juntsukimoto/misc/37869943 日高朋 西岡宗一郎 月本準 田中優希 近藤まり 小林功 笠嶋めぐみ 辻大輔 瀬筒秀樹 瀬筒秀樹 伊藤孝司 トランスジェニックカイコ繭由来CTSAの有効性の検討 (公社)日本薬学会 日本薬学会年会要旨集(CD-ROM) 0918-9823 137th 3 ROMBUNNO.25V-am07S 54 20170000 juntsukimoto/misc/37869944 日高朋 西岡宗一郎 小林功 近藤まり 笠嶋めぐみ 月本準 辻大輔 瀬筒秀樹 瀬筒秀樹 伊藤孝司 トランスジェニックカイコ絹糸腺由来ヒトカテプシンAの分子特性と生物機能評価 (公社)日本薬学会 日本薬学会年会要旨集(CD-ROM) 0918-9823 136th 3 ROMBUNNO.27Q-AM01S 74 20160000 juntsukimoto/misc/37576782 伊藤孝司 伊藤孝司 月本準 東哲也 辻大輔 真板宣夫 ヒトリソソーム性シアリダーゼ(NEU1)のin vivo結晶化と細胞応答及び応用 (公社)日本生化学会 日本生化学会大会(Web) 89th ROMBUNNO.3F10-1 (WEBONLY)1] 20160000 juntsukimoto/misc/38295501 小祝 孝太郎 東 哲也 山田 悠介 平木 雅彦 月本 準 加藤 龍一 千田 俊哉 Chavas Leonard M.G 伊藤 孝司 湯本 史明 ヒトリソソーム性シアリダーゼ(NEU1)の細胞内結晶化と構造解析に向けて (公社)日本生化学会 日本生化学会大会・日本分子生物学会年会合同大会講演要旨集 88·38 [3T17 04(3P0315)] 20151200 juntsukimoto/presentations/36055670 月本準 竹内 美絵 五百磐俊樹 堀井雄登 西岡宗一郎 伊藤孝司 ヒトノイラミニダーゼ 1 細胞内結晶化に対する付加 N 型糖鎖の影響 2021年日本生化学会中四国支部例会 juntsukimoto/presentations/36055663 月本 準 堀井 雄登 五百磐 俊樹 三好 瑞希 西岡 宗一郎 伊藤 孝司 NEU1細胞内結晶化の抑制と NEU1欠損症遺伝子治療への応用 2020年日本生化学会中四国支部例会 juntsukimoto/presentations/36055657 月本準 堀井雄登 五百磐俊樹 三好瑞希 西岡宗一郎 伊藤孝司 ヒトノイラミニダーゼ1細胞内結晶化阻止とリソソーム病治療薬シーズ開発への応用 2020年薬学会中四国支部例会 juntsukimoto/presentations/36055650 月本準 堀井雄登 五百磐俊樹 三好瑞樹 伊藤孝司 ノイラミニダーゼ1の細胞内結晶化抑制とリソソーム病遺伝子治療への応用 第39回日本糖質学会 juntsukimoto/presentations/36055646 月本 準 堀井 雄登 五百磐 俊樹 西岡 宗一郎 伊藤 孝司 NEU1の細胞内結晶化阻止と遺伝子治療への応用 2020年薬学会本会 juntsukimoto/presentations/36055640 月本準 竹内 美絵 五百磐俊樹 堀井雄登 西岡宗一郎 伊藤孝司 ヒトノイラミニダーゼ1細胞内結晶化に対する付加N型糖鎖の影響 2021年生化学会大会 juntsukimoto/presentations/36055627 月本 準 竹内 美絵 五百磐俊樹 堀井雄登 西岡宗一郎 伊藤孝司 N型糖鎖付加のヒトノイラミニダーゼ1細胞内結晶化への影響 第40回日本糖質学会 juntsukimoto/presentations/36055612 月本準 堀井雄登 五百磐俊樹 三好瑞希 西岡宗一郎 伊藤孝司 ノイラミニダーゼ1(NEU1)の細胞内結晶化阻止とNEU1欠損症遺伝子治療シーズへの応用 2021年薬学会年会 Jun Tsukimoto 月本 準 第63回日本先天代謝異常学会 Finalist Award for the Best Presentation by a Young Scientist 若手優秀演題最終候補賞 Suppression of in cellulo crystallization of neuraminidase1 (NEU1) and therapy for NEU1 deficiency. ノイラミニダーゼ1(NEU1)細胞内結晶化阻止とNEU1欠損症の治療 20221100 Jun Tsukimoto 月本 準 第95回日本生化学会大会 Best Presentation Award for Young Scientists 若手優秀発表賞 Suppression of in cellulo crystallization of human neuraminidase1 and application for lysosomal storage disease ノイラミニダーゼ1細胞内結晶化抑制とリソソーム病治療応用 20221100 月本 準 第62回日本生化学会中四国支部例会 学生優秀発表賞 ヒトノイラミニダーゼ1細胞内結晶化に対する付加N型糖鎖の影響 20210900 徳島大学 徳島大学学生表彰 20200300 月本 準 第18回次世代を担う若手ファーマ・バイオフォーラム 優秀発表賞 ヒトノイラミニダーゼ1の細胞内結晶化抑制とNEU1欠損症遺伝子治療 20190900 月本 準 未来博士3分間コンペティション2019 マイクロン賞 ヒトノイラミニダーゼ1(NEU1) 細胞内結晶化の制御 20190900 月本 準 第92回日本生化学会大会 若手優秀発表賞 ヒトノイラミニダーゼ1細胞内結晶化の阻止とリソソーム病治療 20190900 月本 準 第60回日本生化学会中四国支部例会 学術奨励賞 ヒトノイラミニダーゼ1の細胞内結晶化抑制とNEU1欠損症治療への応用 20190500